Fluoreszcens mikroszkópia: módszerek alapelvei

Felszívódás és újra kibocsátott fény további szervetlen és szerves folyadékokat az eredménye a foszforeszcencia vagy fluoreszcens. A különbség a jelenség az időtartama közötti intervallum abszorpciós és emissziós fény fluxus. Amikor a fluoreszcencia ilyen folyamatok zajlanak szinte egyszerre, míg a foszforeszkáló - némi késéssel.

történelmi adatok

1852-ben, a brit tudós, Stokes, elsőként leírt fluoreszcencia. Ő vezetett be egy új kifejezést eredményeként a kísérletek folypátra ami piros fényt bocsásson ki ultraibolya fényben. Stokes megjegyezte egy érdekes jelenség. Azt találtuk, hogy a hullámhossz a fluoreszcens sugárzás mindig nagyobb, mint az áramlás a gerjesztő fény.

Ahhoz, hogy megerősítik azt a hipotézist, a 19. században már számos kísérletet. Megmutatták, hogy a különböző minták fluoreszkál befolyása alatt ultraibolya fényt. Anyagok közül, többek között, volt kristályok, gyanták, ásványi anyagok, klorofill, drog, szervetlen vegyületek, vitaminok, olajok. A közvetlen színezékek alkalmazása a biológiai tesztek kezdődött csak 1930

Fluoreszcens mikroszkópia: leírás

Néhány a felhasznált anyagok, az első felében a 20. század vizsgálatok mutattak nagy jellegét. стал важнейшим инструментом и в биомедицинских, и в биологических исследованиях. Hála a teljesítményt, amelyet nem lehetett elérni kontrasztos módszerek, a módszer a fluoreszcens mikroszkópia vált nélkülözhetetlen eszköze az orvosbiológiai és biológiai kutatásokhoz. Ugyanilyen fontos eredményeket kaptunk, és bizonyos anyagokat.

? Milyen előnyöket kínál a módszer a fluoreszcens mikroszkópia? Segítségével új anyagok lehetővé vált, és a kiválasztás nagyon specifikus sejt szubmikroszkópos alkatrészeket. Fluoreszcens mikroszkópia képes észlelni egyes molekulák. Sokféle festék azonosításának lehetővé tétele egyszerre több elem. Annak ellenére, hogy a korlátozott térbeli felbontás a diffrakciós határ a berendezés, ami viszont, függ az adott tulajdonságok a minta, a molekulák azonosítását e szint alatt is elég lehet. Különböző mintákat besugárzás után mutatnak autofluoreszcencia. Ez a jelenség széles körben használják a kőzettan, botanika, a félvezető iparban.

Jellemzők

Tanulmány állati szövetek vagy kórokozók gyakran bonyolult vagy túl gyenge vagy túl erős specifikus autofluoreszcenciája. Azonban, az értéket vizsgálatokban megszerzi bejuttatásakor anyag komponensek gerjesztettük egy adott hullámhosszú és a kibocsátó a szükséges fény áramlás intenzitása. A fluorokrómok jár színezékek képesek egymástól függetlenül kapcsolódnak struktúrák (látható vagy láthatatlan). Így van egy nagy szelektivitással a cél, és a kvantumhatásfok.

стала широко применяться с появлением естественных и синтетических красителей. Fluoreszcens mikroszkópia már széles körben használják, mivel az Advent a természetes és szintetikus színezékek. Úgy rendelkezett bizonyos intenzitású profilok a emissziós és gerjesztési és célzott specifikus biológiai célokat.

Azonosítása egyes molekulák

Gyakran előfordul, hogy ideális körülmények között, akkor regisztráljon egy külön elem izzás. Ehhez többek között az szükséges, hogy kellően alacsony zajszint, a detektor és az optikai háttérben. Fluoreszcein molekula meghibásodása miatt a foto-kibocsátására is képes akár 300 ezer. Fotonok. 20% -os gyűjtési az eljárás hatékonyságát, és regisztrálja azokat a mennyisége körülbelül 60 ezer.

, основанная на лавинных фотодиодах или электронном умножении, позволяла исследователям наблюдать поведение отдельных молекул на протяжении секунд, а в ряде случаев и минут. Fluoreszcens mikroszkópia alapján lavina fotodióda vagy elektronikus szorzás, lehetővé tette a kutatók számára, hogy figyelje a viselkedését az egyes molekulák révén a második, és bizonyos esetekben még percig.

bonyolultság

A kulcskérdés javára elnyomása optikai zaj háttérben. Annak a ténynek köszönhetően, hogy sok a felhasznált anyagok tervezése szűrők és lencsék néhány autofluoreszcenciája, az erőfeszítések a tudósok a korai szakaszában voltak orientált a termelés alkatrészek, amelyek alacsony fluoreszcencia. A későbbi kísérletek azonban vezettek új következtetéseket. , основанная на полном внутреннем отражении, позволяет достичь низкого фона и высокоинтенсивного возбуждающего светового потока. Különösen azt találtuk, hogy fluoreszcens mikroszkóppal, alapuló teljes belső visszaverődés, ez lehetővé teszi, hogy elérjék az alacsony háttérből, és nagy intenzitású gerjesztő fény.

mechanizmus

, основанной на полном внутреннем отражении, заключаются в использовании быстрозатухающей или нераспространяющейся волны. Az alapelvek a fluoreszcens mikroszkópia alapján teljes belső visszaverődés a használata elhaló hullám, vagy lecsengő. Ez akkor fordul elő a határ között a média különböző törésmutatóval. Ebben az esetben a fénysugár áthalad a prizmán. Ez egy nagy törésmutatójú paramétert.

A prizma szomszédos a vizes oldat vagy üveg, alacsony paraméterrel. Ha egy fénysugár irányul ez szögben, amely több kritikus, a lézersugár tökéletesen tükröződik a felületen. Ez a jelenség, viszont okoz nonpropagating hullámok. Más szóval, a generált elektromágneses mező, amely behatol a közeget egy kisebb törésmutatójú paraméter a távolság kisebb, mint 200 nanométer.

A tünékeny hullám fény intenzitása elegendő lenne, hogy gerjeszti fluorofórokhoz. Azonban, mivel a rendkívül kis mélységű, térfogata lesz nagyon kicsi. Az eredmény egy olyan alacsony szintű háttérben.

módosítás

Fluoreszcens mikroszkópia alapul teljes belső visszaverődés, lehet végrehajtani epi-megvilágítással. Ez megköveteli lencsék nagy numerikus apertúrával (legalább 1,4, de kívánatos, hogy az elérte 1,45-1,6), és részlegesen megvilágított területen berendezésben. Az utóbbi érjük el egy kis folt mérete. A nagyobb egyenletessége egy vékony gyűrű, amely blokkolja egy részét a patak. A kritikus szög, ami után van egy teljes visszaverődés, szükségünk van egy magas szintű fénytörés a merítés közegben a lencse és a fedőlemez a mikroszkóp.